ecL化學發光液的操作注意事項是什么
更新時間:2018-09-10 點擊次數:2995
ecL化學發光液注意事項,由于不同品牌的抗體質量不同,以及抗體的保存條件和保存時間的不同,初次使用時建議對抗體用量進行優化,以取得更優效果。勿將ECL化學發光底物試劑盒暴露在陽光或強光下,否則會導致其失活;建議保存在棕色瓶中,并避免長時間暴露在陽光下,實驗室光照對試劑盒影響不大;除了X光膠片曝光和洗片處理外,所有步驟均不必在暗室中操作。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜,以確保印跡膜處于濕潤狀態;使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。使用前配制ECL工作液,體積足夠覆蓋膜片即可;取A液和B液時一定要用不同的槍頭,互相污染可能導致緩慢失活;配制完畢建議立即使用工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低;棄去使用過的混合試劑。印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時發出的光,然后隨著時間的延長而緩慢減弱,至30 min仍可保持90%的光信號,至24小時仍可保持約60%的光信號;蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間;使用過少的ECL工作液不利反應進行,為達節約目的可將膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。使用生物素/親和素體系時,避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素,容易產生非特異性信號。避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
ecL化學發光液使用方法,印跡膜制備:執行常規電泳、轉膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發光底物,檢測系統必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均勻并盡快使用;將膜片置混合液中,于室溫下孵育約1分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片,注意不要在膜片表面形成氣泡。蛋白或核酸信號顯現,用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑,僅留下少量液體覆蓋表面,不可讓膜*干燥。將膜片置于保鮮膜上,吸附蛋白面朝上,小心趕盡氣泡。用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光,根據信號強弱適當調整曝光時間,也可選擇不同時間多次曝光,以取得更佳效果。
ecL化學發光液 高靈敏性,能快速檢測更廣泛的蛋白范圍,可檢測低達約300飛克的蛋白量。信號穩定,發光時間長,能進行多次曝光,30min后仍可維持約90%的發光強度,6小時后仍能維持60%以上的發光強度。信號強,發光信號比對碘苯酚增強的HRP-魯米諾檢測體系更強。穩定性高,試劑盒可在室溫長期穩定存放。