線粒體染色試劑盒的知識點有必要和大家說說
更新時間:2018-12-22 點擊次數:1484
線粒體染色試劑盒的固定和透化,染色結束后,利用培養液或緩沖液清洗細胞。小心吸走清洗液,換用新鮮配制且預熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養液進行細胞固定。清洗細胞:吸除固定液,用適當緩沖液沖洗細胞數次。細胞透化(可選)可將已固定的細胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結束后,用緩沖液清洗細胞即可進行后續ICC實驗。一般用含0.2% Triton X-100的PBS孵育細胞10分鐘可以達到良好的透化效果。還可利用預冷的丙酮透化5 分鐘,之后用PBS清洗細胞。經驗證,即使后繼沒有進一步的抗體標記,丙酮透化處理也可降低背景信號。
細胞染色,對于貼壁細胞,培養皿/培養板準備細胞樣本。待細胞生長到合適豐度,吸除培養液,加入適量37℃預熱的含探針工作液。于生長狀態下孵育15分鐘~45分鐘(具體孵育時間需根據細胞類型而定,需預實驗優化)也可以將細胞置于培養皿中的蓋玻片上,加入合適培養基,使其爬片生長,利用新鮮培養基替換上述染色液。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間。熒光顯微鏡(含合適濾片)或流式細胞儀、熒光酶標儀下觀察。zui大激發/發射波長為579 / 599nm。或者進行后續的固定和透化步驟,對于懸浮細胞,離心,吸除上清。利用37℃預熱的探針工作液重懸細胞,于生長狀態下孵育30分鐘~2小時(具體時間需根據細胞類型而定,需預實驗優化)離心,吸除染色液,加入新鮮培養液重懸細胞。置于熒光鏡下觀察。或流式細胞儀、熒光酶標儀檢測。zui大激發/發射波長為579 / 599nm。或者進行后續的固定和透化步驟。
線粒體染色試劑盒是一種雙膜結合的細胞器,存在于大多數真核細胞中。線粒體的功能是提供細胞能量。此外,線粒體參與其他任務,如信號傳遞、細胞分化和細胞死亡,以及維持對細胞周期和細胞生長的控制。線粒體與多種人類疾病有牽連,包括線粒體疾病、心臟疾病、心力衰竭和孤獨癥。線粒體可能在這些細胞過程中發揮重要作用。