簡(jiǎn)要描述:EdU(動(dòng)物注射)可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)出DNA復(fù)制活性,此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。容易在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散;無(wú)需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。
產(chǎn)品分類
Product Category詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
細(xì)胞增殖是評(píng)價(jià)細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見(jiàn),能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中,通過(guò)基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng),把熒光基團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)出DNA復(fù)制活性,此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。
傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過(guò)夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn),操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似,大小卻只有BrdU抗體的1/500,很容易在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散;無(wú)需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。
本試劑適用于小鼠、大鼠及其它動(dòng)物模型的各種組織器官的細(xì)胞增殖情況檢測(cè)。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
EdU(動(dòng)物注射) | AC11L271 | 2 mg | 680 |
EdU (動(dòng)物注射) | AC11L272 | 10 mg | 1580 |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品組分 | 試劑量 | 規(guī)格 |
EdU粉末 | 2 mg | 20 T |
EdU粉末 | 10 mg | 100 T |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存,有效期12個(gè)月。
使用方法
本試劑盒適用于各種動(dòng)物活體注射,穩(wěn)定性較好。注射標(biāo)記后可將目標(biāo)組織制備為石蠟或冰凍切片進(jìn)行EdU染色檢測(cè)。【注】:切片后可搭配EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒(李記貨號(hào):AC11L251)使用,進(jìn)行后續(xù)的切片EdU染色檢測(cè)。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法,以1cm×1cm切片為例
實(shí)驗(yàn)前須知:EdU的分子量為252.223,易溶于水,PBS,生理鹽水等溶液,便于動(dòng)物注射使用。建議EdU的初始給藥量為5mg/kg,稀釋濃度為0.5-1mg/mL。具體動(dòng)物模型的注射劑量可根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行調(diào)節(jié)。【注】:我們根據(jù)每只小鼠20g的體重為例,10mg EdU粉末可以注射100只小鼠(100T)。
動(dòng)物EdU注射
【注】:①注射方式:依據(jù)實(shí)驗(yàn)決定,如:腹腔注射、皮下注射、肌肉注射、尾靜脈注射等方式。
②標(biāo)記時(shí)間:最佳標(biāo)記時(shí)間依據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ鲋晨焖俚慕M織及器官采用短時(shí)間標(biāo)記(<12 h)(例如小腸),增殖速度慢的組織及器官可采用長(zhǎng)時(shí)間標(biāo)記(如7 d或更長(zhǎng)時(shí)間,例如大腦)。
③標(biāo)記濃度:最佳標(biāo)記濃度依據(jù)具體實(shí)驗(yàn)而定。
④取樣部位:根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ淮螛?biāo)記可對(duì)多種組織和器官進(jìn)行組織切片。因小腸上皮組織增殖速度較快,標(biāo)記時(shí)間較短(動(dòng)物注射6 d后取組織),建議預(yù)實(shí)驗(yàn)可以取小腸組織檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,作為陽(yáng)性對(duì)照。
切片處理
1.切片前處理:組織器官先進(jìn)行清洗,以去除血液、組織或器官中殘留的EdU,降低背景。
2.切片厚度:3-10um為宜,切片過(guò)厚可能影響切片背景。
3.切片后處理:①石蠟切片脫蠟:二甲苯洗脫3次,每次10 min,乙醇梯度(100%,95%,85%,75%)脫水各1次,去離子水洗脫1次。②冰凍切片處理:室溫放置30 min后,4℃丙酮固定10 min,PBS清洗3次,每次5 min。
4.2mg/mL 甘.an.suan清洗切片10 min。
5.加入100uL 0.5% Triton X-100細(xì)胞通透劑,室溫孵育10 min,再用PBS清洗1次。
后續(xù)進(jìn)行EdU染色步驟需要搭配EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒(李記貨號(hào):AC11L251)進(jìn)行以下步驟:
EdU染色
1.通過(guò)用10:1去離子水稀釋反應(yīng)緩沖液,進(jìn)行配制1×反應(yīng)緩沖液。
2.按照溶解200 mg緩沖添加劑溶于1 mL 去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解,即為可用的緩沖添加劑的濃度,建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
【注】:緩沖添加劑為白色粉末,較難準(zhǔn)確稱量,稱量范圍可稍微放寬,但是不應(yīng)超過(guò)±20%,且該粉末較易氧化,使用后請(qǐng)旋緊管蓋,如試劑出現(xiàn)棕黃色,則需報(bào)廢或更換。
3.按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制:
染色反應(yīng)液組分 | 500 μL | 1 mL | 2 mL | 5 mL |
1X反應(yīng)緩沖液 | 430 μL | 860 μL | 1.8 mL | 4.3 mL |
催化劑溶液 | 20 μL | 40μL | 80 μL | 200 μL |
TAMRA紅色熒光溶液 | 1.2 μL | 2.5 μL | 5 μL | 12.5 μL |
緩沖添加劑 | 50 μL | 100 μL | 200 μL | 500 μL |
4.加入以上配置好的檢測(cè)混合液,以覆蓋組織為宜,避光、室溫孵育30 min。
5.棄染色反應(yīng)液,加入300 μL 0.5% Triton X-100細(xì)胞滲透液清洗2-3次,每次10 min。
6.棄細(xì)胞滲透液,用PBS洗兩次,每次 5 min。
其它染色(自備)
(可選)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)抗原的抗體染色。
DNA染色
1.將Hoechst 33342 *超級(jí)純*(李記貨號(hào):AC12L021)用PBS溶液1:1000進(jìn)行稀釋得到1×Hoechst染色液。
2.加入150 μL 1×Hoechst染色液,室溫避光孵育10-15 min后,棄染色液。
3.PBS清洗細(xì)胞2-3次,去掉洗液。
圖像獲取及分析
建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察;如果條件限制,請(qǐng)于4℃條件下避光濕潤(rùn)保存3 d之內(nèi)完成拍照。可使用抗熒光淬滅封片劑進(jìn)行封片后于4℃條件下保存及拍照檢測(cè)。
熒光染料 | 最大激發(fā)波長(zhǎng) | 最大發(fā)射波長(zhǎng) | 熒光顏色 |
TAMRA | 541 nm | 567 nm | 橘紅色熒光 |
Hoechst 33342 | 350 nm | 461 nm | 藍(lán)色熒光 |
注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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